Domů › Produkty › Fototermální spektroskopie › Multimodální mikroskopie

mIRage®-LS

Sub-500nm O-PTIR s ko-lokovanou fluorescencí a simultánní Ramanovou spektroskopií: mIRage-LS, světově první a jediný

Kolokovaná fluorescenční mikroskopie a submikronová O-PTIR spektroskopie
Chemické prostorové rozlišení v infračerveném záření pod 500 nm
Rychlá fluorescenční identifikace a zobrazování buněk, tkání a bakterií

O platformě mIRage-LS

Platforma mIRage-LS sub-500nm O-PTIR přináší revoluci ve výzkumu biologických věd kombinací ko-lokované O-PTIR a fluorescenční mikroskopie. Fluorescenční mikroskopie poskytuje molekulární specificitu, zatímco vibrační spektroskopie (IR a Ramanova spektroskopie) nabízí prostorově rozlišenou charakterizaci makromolekul. Integrace těchto technik umožňuje výzkumníkům zkoumat biologické vzorky s bezkonkurenčními detaily.

Díky kombinaci rozlišení mIRage-LS sub-500nm O-PTIR, simultánní Ramanovy a ko-lokované fluorescence lze dosáhnout korelačního zobrazování v měřítku <500 nm. Tato bezproblémová platforma bez nutnosti registrace synergicky kombinuje tyto metody, odemyká hlubší molekulární poznatky a umožňuje transformativní objevy, kterých by nebylo možné dosáhnout s použitím obou technologií samostatně.

Kolokovaná fluorescence + submikronové infračervené záření buněk

Co-located-FL-sub-micron-IR-of-cells-final-3-500x500-1

Buňky neurogliomu byly obarveny pomocí G3BP1 na proteinové stresové granule, DAPI na jádro a BODIPY na lipidy.

Obrázek: RBG překryvný širokoúhlý epifluorescenční snímek s červenou barvou znázorňující proteinové stresové granule, modrou barvou znázorňující jádro a zelenou barvou znázorňující lipidy. Čtvercové značky ukazují umístění spektrálního sběru O-PTIR.

Pravá strana ukazuje snímek ve světlém poli. Čtvercové značky ukazují umístění spektrálního sběru O-PTIR.

O-PTIR spektra byla získána během několika sekund z umístění markerů zobrazených v levém a středním panelu. Lze pozorovat jasné spektrální rozdíly, které odpovídají cílovým subcelulárním vlastnostem. Zvláště pozoruhodný je jemný posun v amidovém I pásu proteinové stresové granule, což naznačuje pravděpodobně odlišnou sekundární strukturu proteinu od ostatních umístění.

Aplikace mIRage-LS
Zobrazování tkání a buněk

Jednotlivé buňky: diferenciace normálních/nemocných buněk, interakce léků s buňkami, intracelulární (lipidové kapénkové) zobrazovací studie
Tkáně; typizace buněk, kalcifikace, chorobný stav, orientace kolagenu
Bakterie; Identifikace bakterií na úrovni jednotlivých buněk, studium buněčného metabolismu pomocí značení stabilními izotopy (13C, 15N, deuterium)

widefield_fluorescence-e1731102294470-1024x740

mIRage-LS využívá kolokovanou fluorescenci k lokalizaci měření O-PTIR

Řez mozkové tkáně myši s Alzheimerovou chorobou byl obarven barvou Amytracker 630 pro zvýraznění agregátů amyloidu, barvou AF488 pro zvýraznění proteinů a barvou DAPI pro jádro.

Na obrázku vlevo je zobrazen snímek obarveného vzorku ve světlém poli. Vpravo nahoře je kompozitní fluorescenční snímek RBG, který červeně/oranžově zvýrazňuje oblasti agregace amyloidu. Všimněte si, jak některé agregáty amyloidu zvýrazněné na fluorescenčním snímku nejsou na snímku ve světlém poli snadno rozlišitelné.

Using-fluorescence-to-localize-O-PTIR-measurements-3-final-1024x873

Dole je zprůměrované O-PTIR spektrum z profilu čáry uvedeného na fluorescenčním snímku, se spektry zprůměrovanými na (modře) a mimo (červeně) agregát. Průměrné spektrum agregátu vykazuje zřetelné spektrální rozdíly v pásu amidu I s významným spektrálním rysem při 1631 cm-1, typickým pro struktury beta listu proteinů.

To jasně demonstruje užitečnost kombinace fluorescenčního zobrazování pro zvýraznění oblastí agregace amyloidu, z nichž některé nelze snadno vidět v mikroskopii ve světlém poli, se submikrometrovou O-PTIR spektroskopií, která pak může poskytnout informace o molekulárním složení, v tomto případě je obzvláště citlivá na sekundární strukturu proteinu, což je charakteristická silná stránka IR spektroskopie.